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多肽在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前,冷凍干燥多肽可以放于室溫 小的工作樣量存放。
對(duì)于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對(duì)其溶解必不可少,因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化,在封瓶前,慢也容易降解,所有這些肽與不含這些有問(wèn)題解苷的那些肽相比,生命期有限。
多肽的溶解性
大多數(shù)肽的首選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多 溶解,這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意。 殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。 您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助,請(qǐng)隨時(shí)與我們聯(lián)系。 我們包你完全滿意,對(duì)于我們不能適當(dāng)合成的順序包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。
例如,氨基酸分析決定的肽含量是大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實(shí)際肽量不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%, 而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)(如Arg, Lys )的抗離子量和肽所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱, 最好為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。肽溶液的保存溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的,為避免樣品的反復(fù)凍融, 最好分成小 溶液肽的麻煩, 為克服此,肽應(yīng)溶于無(wú)菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過(guò)濾。
多肽的重建和操作
多數(shù)肽溶于無(wú)菌蒸溜水。初次溶解時(shí),要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:對(duì)堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu)對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物(Acetonitnile , Methanol) 極不溶的肽用DM50或DMF guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用,與上述方法合用, 聲處理也是溶解多肽的有效手段。
多肽應(yīng)用和保存
多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問(wèn)題是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。除了最太肽外,這點(diǎn)都會(huì)發(fā)生, 在有多重疏水 蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用聲處理。溶解仍有問(wèn)題, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,要長(zhǎng)期保存多肽, 最好冷凍干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無(wú)降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定含有Met, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化,壽命有限。應(yīng)溶于無(wú)氧溶劑, 為防止重復(fù)凍融的破壞, 建議 HPLC分析和純化分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng),可以經(jīng)受傳遞高壓,這樣可以用極細(xì)的微粒(3-10μ m)做填料。
由此多肽要 HPLC分兩類(lèi):離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍 基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用,通過(guò)可變PH, 離子強(qiáng)度, 或兩者洗脫出多肽,通常, 先 火柱中洗脫出。離子交換分離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過(guò)酸性PH中帶正電來(lái) 反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過(guò)疏水作用連到柱上,用降低離子強(qiáng)度洗脫, 如增加洗脫劑的疏水 為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長(zhǎng)鏈柱比短鏈對(duì)小的, 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱 別類(lèi)載體由碳水化合物構(gòu)成, 比如苯基。
典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×10(3-10μ m)和25×250m大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點(diǎn):硅反相柱料不能長(zhǎng)時(shí)間暴露于高pH,甚至微堿pH。
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