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肽鏈N端乙酰化,C端酰胺化修飾
化學(xué)合成的肽鏈往往帶上分散的氨基和分散的羧基。而肽的序列往往意味著了母本蛋白的序列,為了與母本蛋白更加貼近,肽尾端往往需要封閉,即N端乙酰化和C端酰胺化,那樣修飾的目地是降低多肽的總正電荷,減少多肽的溶解度,另外還可以使肽模擬它在母本蛋白中α氨基和羧基的初始情況。
大家需要了解,公司在收到的顧客定制多肽要求,假如顧客沒有標(biāo)明需要N端乙?;?,或是C端的酰胺化;一切正常流程生成的多肽鏈,N端和C端都是外露的。因此,假如需要對N端進(jìn)行乙酰化修飾或?qū)?/span>C端進(jìn)行酰胺化修飾,在提交訂單時要確立。由于生成一旦完畢,則不可以再進(jìn)行改動。
多肽磷酸化修飾
磷酸化多肽關(guān)鍵指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的主鏈甲基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白磷酸化過程的必不可少的專用工具,因而研究蛋白及多肽的磷酸化反映并明確完善簡便的生成線路就變得十分關(guān)鍵。目前為止,多肽的磷酸化修飾關(guān)鍵有后磷酸化法和單個法二種生成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上生成完后,再對在其中的Ser、Tyr或Thr的主鏈甲基進(jìn)行磷酸化;單個規(guī)律是將適度維護(hù)的磷酸化氨基酸立即引進(jìn)到多肽序列中,這類方法較后磷酸化法實際操作更加簡便,早已變成多肽磷酸化修飾的關(guān)鍵方法。
熒光標(biāo)記時,肽和修飾標(biāo)記的染劑中間需要加一個間距嗎?
大部分生物活性染料歸屬于大分子量脂環(huán)氨基酸,在多肽序列中引進(jìn)這一類大中型分子結(jié)構(gòu),為了防止多肽與標(biāo)識中間產(chǎn)生相互影響,保持蛋白的構(gòu)象以及分子生物學(xué)特異性,固拓生物生物推薦引進(jìn)一個可彎折的間距區(qū),例如Ahx,。Ahx是一個帶有6碳分子結(jié)構(gòu)的環(huán)形結(jié)構(gòu),能夠保持熒光標(biāo)識的可靠性。假如在生成中不加上這一個間距區(qū),FITC很容易結(jié)合多肽序列中的半胱氨酸殘基或是賴氨酸殘基。
一般狀況下,生物素、FITC一類的染劑既能夠標(biāo)記在蛋白的氨基端還可以標(biāo)記在蛋白的羧基端。殊不知,為了在最短期內(nèi)內(nèi),最方便快捷又高效地合成多肽,固拓生物推薦顧客挑選標(biāo)記在氨基端。由于一個多肽的合成往往是以羧基端剛開始的,這樣一來,氨基端修飾便變成最后一個階段,不用再進(jìn)行特別的結(jié)合功效。相反,羧基端修飾需要附加的階段,因而過程更為繁雜。
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