雖然多肽生成的氨基酸組成統(tǒng)計(jì)分析方式較多，且趨向更機(jī)敏、更精準(zhǔn)、更簡(jiǎn)易、更快速，但都還沒(méi)一種方法可以單獨(dú)可用所有氨基酸殘基的檢測(cè)，并且很多因素如溫度、時(shí)間、水解反應(yīng)試劑、水解反應(yīng)方法及多肽生成樣品中添加劑等對(duì)水解程度均有影響。常見(jiàn)的水解反應(yīng)方法作簡(jiǎn)單詳細(xì)介紹下列:

1.酸堿度水解反應(yīng)

酸堿度水解反應(yīng)是應(yīng)用更為廣泛水解反應(yīng)方法，可以使大部分氨基酸殘基完全水解反應(yīng)，最實(shí)用性的水解反應(yīng)劑是6mol/LHCI。

規(guī)范:6mol/LHCI、機(jī)械泵、110℃.水解反應(yīng)時(shí)間為20-24小時(shí)。就可以用于高效液相水解反應(yīng)方法也能用以高效液相水解反應(yīng)方法。但在該規(guī)范下，天冬酰胺和谷氨酰胺分別被完全水解反應(yīng)為天冬氨酸和磷酸，磷酸則被完全損壞，胱胺酸最先用二硫代二己酸、4一丁二烯呲啶或碘代甲酸維護(hù)保養(yǎng)后水解反應(yīng)就可以測(cè)量，酷氨酸一部分被水解反應(yīng)液所損壞，絲氨酸和蘇氨酸被一部分水解反應(yīng)。一些脂環(huán)族氨基酸殘基間的肽鍵無(wú)法裂化，可以依據(jù)提升水解反應(yīng)時(shí)間如水解反應(yīng)92h甚至120h來(lái)解決。

2.偏堿水解反應(yīng)

偏堿水解反應(yīng)一般采用NaOH和KOH作為水解反應(yīng)劑。該水解反應(yīng)方法是HCI水解反應(yīng)的相輔相成法。因?yàn)閴A水解反應(yīng)時(shí)，大部分氨基酸遭受損壞或外消旋化，僅磷酸是穩(wěn)定的。因而 此方式僅限測(cè)量磷酸。

3.酶水解反應(yīng)

用一組蛋白酶水解反應(yīng)肽鏈，尤其可用對(duì)分析化學(xué)水解反應(yīng)較為敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的測(cè)量。水解反應(yīng)整個(gè)過(guò)程中氨基酸不造成消旋化，大部分可以維持所有的組成氨基酸不被損壞。但是因?yàn)槊杆夥磻?yīng)規(guī)范溫和，對(duì)天冬酰胺、谷氨酰胺等皆無(wú)損壞功效，且體現(xiàn)必須較長(zhǎng)的時(shí)間，水解反應(yīng)不完全，酶本身也是蛋白，對(duì)樣品的測(cè)量結(jié)果很有可能會(huì)出現(xiàn)危害。

微波輻射能水解反應(yīng)，一般情況下190℃微波加熱水解反應(yīng)15分鐘肽類就可以完全水解反應(yīng)，導(dǎo)致 完全水解反應(yīng)的時(shí)間大大縮短。在微波加熱輔助酸水解反應(yīng)和微波加熱輔助酶水解反應(yīng)中，水解反應(yīng)時(shí)間可從過(guò)去的幾十小時(shí)減少到幾十分鐘。

總體來(lái)說(shuō)，多肽生成藥物水解反應(yīng)方式應(yīng)根據(jù)其產(chǎn)品的特點(diǎn)、科學(xué)研究目的、可獲得的試品量及少實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)采用合適的水解反應(yīng)方法。

原創(chuàng)文章如有轉(zhuǎn)載，請(qǐng)注明出處“本文首發(fā)于固拓多肽合成生物科技有限公司（vonev.cn）”