伴隨著 細(xì)胞培養(yǎng) 工藝 灌流 和連續(xù)流工藝 創(chuàng)新和改善 ，抗體生產(chǎn)量從每升好幾百 mg提升 到5-10 g乃至 高些 到50 g/L之上 ，大規(guī)模 抗體生產(chǎn)制造 的“短板 ”和產(chǎn)品成本慢慢從抗體 表述 轉(zhuǎn)移 到 抗體 純化 ，因而對(duì)提升純化通量和高效率 ，控制成本的要求越來(lái)越大，變成抗體生產(chǎn)工藝科學(xué)研究的一個(gè) 關(guān)鍵 。

提升抗體純化高效率 一方面 能夠根據(jù)提升目前純化工藝技術(shù) 、方式 和工藝，發(fā)掘目前純化技術(shù)性的發(fā)展?jié)摿?/span> 。另一方面則能夠根據(jù)開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)創(chuàng)新能力的物質(zhì)和工藝，從根本上提升目前技術(shù)性障礙 。

概述

抗體分離純化的主要目地是將抗體與工藝有關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品有關(guān)雜質(zhì)分離出來(lái)，最后得到高純 、低潛在傷害的抗體藥物。純化全過(guò)程中必須去除的工藝有關(guān)雜質(zhì)包含細(xì)胞 、細(xì)胞殘片、靶細(xì)胞蛋白質(zhì) 、靶細(xì)胞核苷酸及培養(yǎng)液與投料液成份 ，需去除的產(chǎn)品有關(guān)雜質(zhì)主要包含抗體精彩片段和聚集體 。 

純化全過(guò)程還需具有充足的病毒滅活去除工作能力，以去除靶細(xì)胞本身表述 的內(nèi)源性病毒感染樣顆粒物和未及時(shí)處理的外源性病毒感染 。大部分工藝運(yùn)用ProteinA來(lái)捕捉抗體 ，并運(yùn)用了最少一個(gè)離子交換法層析做為植萃流程 ，僅極少數(shù)工藝應(yīng)用了親水性 、羥基磷灰石和碳分子篩層析等流程 。

反應(yīng)器 獲得液最先歷經(jīng) 離心 和過(guò)濾，去除細(xì)胞和細(xì)胞殘片 ，隨后歷經(jīng)ProteinA層析捕捉抗體 ,捕捉 后的抗體 經(jīng)低pH 孵育 后，根據(jù) 2個(gè)離子交換法層析開(kāi)展植萃 ,隨后開(kāi)展病毒感染 過(guò)濾 ，最終換液并調(diào)節(jié)抗體濃度值 ，獲得抗體源液 。工藝中的低pH 孵育 和病毒感染過(guò)濾是2個(gè)正交和的專(zhuān)享病毒感染去除消滅流程 。 這兩個(gè)專(zhuān)享流程與層析流程一起 ，可大幅度降低源液中很有可能存有的病毒感染數(shù)量 。

第一話(huà)離心 、過(guò)濾

抗體為胞外分泌 型表述 ，純化 的第一步是將細(xì)胞培養(yǎng)液上清與細(xì)胞及細(xì)胞殘片分離出來(lái)起來(lái) 。 

在試驗(yàn)室經(jīng)營(yíng)規(guī)模 ，分離出來(lái)可根據(jù)簡(jiǎn)易批號(hào)離心進(jìn)行 ，但大規(guī)?？贵w生產(chǎn)制造主要選用持續(xù)分離出來(lái)的方式 ，主要 包含深層過(guò)濾 、徑向流過(guò)濾和連續(xù)流離心 。深層 過(guò)濾的優(yōu)勢(shì)是簡(jiǎn)易實(shí)用 ，早期資金投入低。

深層過(guò)濾物質(zhì)的直徑遍布比較廣泛，內(nèi)面積大，可借助直徑截流和內(nèi)表層吸咐雙向功效去除固態(tài)顆粒物，比單一直徑濾器能解決更很多的固態(tài)雜質(zhì) ，且水流量更快。

深層過(guò)濾系統(tǒng) 由一系列的濾器 構(gòu)成 ，物質(zhì) 的直徑 從上下游到中下游下降 （見(jiàn)圖2）。深層 過(guò)濾 自身 不可以做到無(wú)菌檢測(cè)過(guò)濾 ，因此 過(guò)濾系統(tǒng) 的最終 一級(jí) 一般必須 一個(gè)無(wú)菌檢測(cè) 濾器 。 

深層 過(guò)濾 物質(zhì) 中帶有凹凸棒土 ，凹凸棒土在抗體純化標(biāo)準(zhǔn)下帶正電 ，在去除細(xì)胞和細(xì)胞殘片的狀況 下，還能夠去除 一部分帶負(fù)電的靶細(xì)胞核苷酸和靶細(xì)胞蛋白 ，具有基本純化的功效 。

深層 過(guò)濾 的缺點(diǎn) 是一次性 過(guò)濾芯 應(yīng)用花費(fèi)高和產(chǎn)出量比較有限 ，在解決大容積細(xì)胞培養(yǎng)液時(shí)要串聯(lián)好幾個(gè)濾器 ，花費(fèi)和占地明顯提升，因此 深層過(guò)濾的使用范疇僅限于100 -2000 L的小試經(jīng)營(yíng)規(guī)模的抗體純化 。

徑向 流濾器在灌流 反應(yīng)器 一部分比較常見(jiàn) （見(jiàn)圖3），其高徑向的水流量可降低細(xì)胞在膜表層的堆積 ，進(jìn)而能夠 解決大容積 細(xì)胞培養(yǎng)液而不導(dǎo)致 膜的阻塞 。徑向 流的水流量越高，細(xì)胞堆積越少，但同時(shí)產(chǎn)生的剪切應(yīng)力越高，細(xì)胞粉碎風(fēng)險(xiǎn)性越大。 

細(xì)胞 粉碎 產(chǎn)生 的細(xì)胞 殘片 更非常容易堵塞過(guò)濾芯 ，而且細(xì)胞粉碎 釋放出來(lái)的胞內(nèi)蛋白和核苷酸將大大增加事后純化流程的工作壓力 。徑向 流濾器 的應(yīng)用 以空心 化學(xué)纖維更為 廣泛 ，其面積大，又可以在孔腔內(nèi)產(chǎn)生高剪切應(yīng)力 。 空心化學(xué)纖維 濾器的工藝變大可根據(jù)提升化學(xué)纖維數(shù)量進(jìn)行，簡(jiǎn)便易行。在徑向流過(guò)濾工藝開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)和提升層面，必須考慮 的包含過(guò)濾芯成分、過(guò)濾芯面積、直徑 、徑向流水流量 、跨膜工作壓力 。徑向流過(guò)濾存有死容積 ，可在過(guò)濾中后期加微信好友小量緩沖溶液 ，減少死容積中的抗體成分，降低抗體損害。

徑向 流過(guò)濾 產(chǎn)出量 大，可用以超出10000 L細(xì)胞培養(yǎng) 的分離出來(lái)，做到每鐘頭近5000 L的液態(tài)產(chǎn)出量 。 其局限性取決于濾器花費(fèi)較高，過(guò)濾時(shí)間較長(zhǎng)，而且過(guò)濾速率的可預(yù)測(cè)性低。連續(xù)流 離心 ，尤其是選用光碟式離心機(jī)開(kāi)展 的連續(xù)流離心 ，是大規(guī)模抗體生產(chǎn)制造中主要選用的分離出來(lái)方式 。

光碟式離心機(jī)腔體為錐型 ，細(xì)胞培養(yǎng)獲得液在挨 軸部添加，離心 后上清液從軸部周邊排出來(lái) ，細(xì)胞在向心力功效下，在錐型 的底端邊框線(xiàn) 周邊集聚結(jié)團(tuán) 。腔體按時(shí)在細(xì)胞集聚 處輕度打開(kāi)，運(yùn)用 腔身體的工作壓力將細(xì)胞 排出來(lái) 。 

細(xì)胞排出來(lái)帶入的液態(tài)損害可根據(jù)向心力（轉(zhuǎn)速比 ）、腔體打開(kāi)頻率和打開(kāi)時(shí)間的提升，操縱在5%下列 。

連續(xù)流 離心可以去除絕大部分細(xì)胞和細(xì)胞殘片。 殘余的小量細(xì)胞殘片可以用深層過(guò)濾去除 。光碟式離心機(jī)的優(yōu)勢(shì)是體型小 ，雙層光碟產(chǎn)生的沉降總面積大，液態(tài)產(chǎn)出量大，操作簡(jiǎn)易、靠譜 ，應(yīng)用花費(fèi)低。 

其缺點(diǎn)是早期設(shè)備項(xiàng)目投資髙，清理較繁雜 ，并缺乏適合的小試模型 。連續(xù)流 離心機(jī)與沉降器一樣運(yùn)用細(xì)胞與培養(yǎng)液的相對(duì)密度差完成固液分離 。細(xì)胞培養(yǎng)液自離心機(jī)底端入料，在向心力的功效下，細(xì)胞在腔體的最外場(chǎng)聚集。左右腔體周期性地短暫開(kāi)啟 ，釋放出來(lái)消除腔身體累積的細(xì)胞，這一部分細(xì)胞回到反應(yīng)器 。  

連續(xù)流離心分離機(jī)速度更快，液態(tài)產(chǎn)出量大，可完成達(dá)到3600 L/d的灌流速率，細(xì)胞分離出來(lái)效果高過(guò)90 %，有非常好的應(yīng)用前景。連續(xù)流離心機(jī)的缺點(diǎn)是設(shè)備和操作相對(duì)性繁雜，機(jī)械設(shè)備和操作常見(jiàn)故障風(fēng)險(xiǎn)性相對(duì)性較高。同時(shí)離心時(shí)產(chǎn)生的細(xì)胞團(tuán)有可能導(dǎo)致部分營(yíng)養(yǎng)成分缺少或副產(chǎn)物累積 ，其水平和危害需進(jìn)一步調(diào)查 。連續(xù)流離心機(jī)在操作時(shí)還需考慮細(xì)胞的剪切應(yīng)力耐受力，防止細(xì)胞損害 。

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