怎樣計(jì)算多肽的濃度？

肽純度就是指目標(biāo)序列占肽總產(chǎn)量的百分?jǐn)?shù)。由于生成中肽鍵的產(chǎn)生并不是100%，因此最開(kāi)始的肽非是全部的多肽鏈全是目標(biāo)序列。有一些鍵很有可能無(wú)法生成，或是氨基酸很有可能無(wú)法準(zhǔn)確地與一些鏈結(jié)合。由于多種原因產(chǎn)生的不正確序列，在化合物中占一定占比。杭州固拓生物應(yīng)用反相高效液相色譜法結(jié)合質(zhì)譜分析對(duì)粗肽開(kāi)展分析和純化，以得到需要的目標(biāo)序列純度。必須明白的是即便 是經(jīng)過(guò)純化以后，獲得的產(chǎn)品也混有一小部分的非肽物質(zhì)，比如鹽。

肽被純化和凍干后，一般獲得的產(chǎn)品是白色粉狀。白色肽粉將包括一些非肽成份，似水、消化吸收溶劑、反離子和鹽。凈肽成分包含最后產(chǎn)品中肽的真實(shí)重量百分?jǐn)?shù)。這一數(shù)據(jù)在50%到90%中間轉(zhuǎn)變，這在于純度、生成和純化的次序和方式。在預(yù)估用以生物分析或別的比較敏感肽試驗(yàn)的肽物質(zhì)的量濃度時(shí)，必須考慮肽成分。肽濃度能夠根據(jù)減去非肽重量來(lái)明確融解溶劑的容積。比如，當(dāng)應(yīng)用1mg最后產(chǎn)品做成1mg/ml肽成分為80%的水溶液時(shí)，您將應(yīng)用800ul而不是1000ul的溶劑。

肽成分并不是肽純度的指標(biāo)值；杭州固拓生物提示：這也是二種測(cè)量方法。純度由高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定，并指示是不是存有含有不希望序列的污染肽。非肽的總成分與總肽成分不相干。根據(jù)氨基酸分析或紫外線分光光度法精確測(cè)定凈肽成分。

依據(jù)凍干肽的重量難以明確具體的肽濃度。凍干肽可帶有10-70%重量的水和鹽。與疏水性肽對(duì)比，吸水性更強(qiáng)的肽一般帶有大量的結(jié)合水和鹽。

假如肽序列中有頭發(fā)顏色團(tuán)（W或Y殘基），依據(jù)這種殘基的消光系數(shù)能夠便捷地明確肽濃度。

下列流程可用以測(cè)算：

在280nm中性化pH標(biāo)準(zhǔn)下達(dá)色殘基的摩爾消光系數(shù)：

谷氨酸5560AU/mmole/ml

色氨酸1200AU/mmole/ml

肽序列中每一個(gè)頭發(fā)顏色團(tuán)的消光系數(shù)一般被覺(jué)得是加性的，即肽的總摩爾消光系數(shù)在于序列中這種同宗殘基的類別和總數(shù)。

測(cè)算：mg肽/ml=（A280xDFxMW）/e，在其中A280是水溶液在1cm體細(xì)胞中280nm處的具體OD值，DF是稀釋液因素，MW是肽的相對(duì)分子質(zhì)量，e是每一個(gè)生色團(tuán)在280nm處的摩爾消光系數(shù)

事例：在一個(gè)1公分的體細(xì)胞中，序列為grkkrqrrrppqq（MW=1847）的肽的50倍稀釋溶液在280nm處讀值為0.5AU。測(cè)算肽貯備水溶液中的初始肽濃度：

Mg肽/ml=（0.5AUx50x1847Mg/mmole）/[（1x5560）+（2x1200）]AU/mmole/ml=5.8

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