液相色譜是一種分離分析技術(shù)，其特點(diǎn)是液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙張、薄板和填充床。在色譜技術(shù)的發(fā)展過程中。為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式，如紙色譜、薄色譜和柱液相色譜。

液相色譜儀的要求

1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)試劑過濾除去顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)(用0.45μm或更薄的膜過濾)。

2.流動(dòng)相過濾后應(yīng)使用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)恢復(fù)到室溫。

3.不能使用純乙腈作為流動(dòng)相，使單向閥粘住，導(dǎo)致泵不進(jìn)液。

4.使用緩沖溶液時(shí)，樣品完成后，應(yīng)立即用去離子水沖洗管道和柱子一小時(shí)，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，以充分沖洗離子。對(duì)于柱塞桿外部，樣品完成后必須用去離子水沖洗20毫升以上。

5.如果長時(shí)間不使用儀器，應(yīng)取下柱子，用堵頭密封保存。注意柱子不要用純水保存，要用有機(jī)相(如甲醇等)。)，因?yàn)榧兯菀装l(fā)霉。

6.每次樣品完成后，應(yīng)用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。

7.C18柱絕對(duì)不能進(jìn)入蛋白質(zhì)樣品、血樣、生物樣品。

8.堵塞導(dǎo)致壓力過大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管道過濾器→單向閥檢查清洗。清洗方法:

①以異丙醇為溶劑沖洗；

②在異丙醇中間用超聲波清洗；

③用10%稀硝酸清洗；

9.氣泡會(huì)導(dǎo)致壓力不穩(wěn)定，重現(xiàn)性差，因此在使用過程中盡量避免氣泡。

10.如果進(jìn)液管內(nèi)沒有液體，則使用注射器吸液：通常在輸液前清洗流動(dòng)相。

11.注意柱子的pH值范圍，不要注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿樣品，特別是堿性樣品。

12.更換流動(dòng)相時(shí)，先將吸濾頭部分放入燒杯中振動(dòng)邊洗，再插入新的。

流動(dòng)相中。更換無互溶性流動(dòng)相時(shí)，用異丙醇過渡。

常見故障的確定和解決方法

(1)保留時(shí)間變化。

1.柱溫變化：柱溫恒定，必要時(shí)需配置恒溫箱。

2.等度與梯度之間未能充分平衡：流動(dòng)相平衡柱至少為10倍。

3.緩沖液容量不足：使用25mmol/L的緩沖液。

4.柱污染：每日沖洗柱。

5.柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進(jìn)樣條件，調(diào)節(jié)流動(dòng)相。

6.柱快達(dá)壽命：采用保護(hù)柱。

（2）縮短保留時(shí)間。

1.增加流速：檢查泵，重新設(shè)置流速。

2.樣品超載：減少樣品量。

3.鍵合相流失：流動(dòng)相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。

4.流動(dòng)相組成變化：防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀。

5.溫度增加：柱恒溫。

(3)延長保留時(shí)間。

1.流速下降：管道泄漏，更換泵密封圈，排除泵內(nèi)氣泡。

2.硅膠柱上的活性點(diǎn)變化：用流動(dòng)相改性劑，如加三乙胺，或用堿至鈍化柱。

3.鍵合相流失：同前（2）3。

4.流動(dòng)相組成變化：同前（2）4。

5.降溫：同前（2）5。

(4)肩峰或分*

1.樣品體積過大：用流量配樣，總樣品體積小于第一峰的15%

2.樣品溶劑過強(qiáng)：使用較弱的樣品溶劑。

3.柱坍塌或形成短路通道：更換色譜柱，腐蝕性較弱。

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼，添加在線過濾器，過濾樣品。

5.進(jìn)樣器損壞：更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子。

(五)鬼峰

1.進(jìn)樣閥殘余峰：每次使用后用強(qiáng)溶劑清洗閥門，改進(jìn)閥門和樣品的清洗。

2.樣品中未知物：處理樣品。

3.柱不平衡：重新平衡柱，用流動(dòng)相作樣品溶劑（特別是離子對(duì)色譜）

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每日新配，使用抗氧化劑。

5.水污染（反相）：通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)，使用HPLC級(jí)水。

(6)基線噪聲。

1.氣泡(尖峰）流動(dòng)相脫氣：加柱背壓。

2.污染(隨機(jī)噪聲):清洗柱，凈化樣品，使用HPLC級(jí)試劑。

3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲：更換鱸燈。

4.電干擾（意外噪聲）：使用穩(wěn)壓電源，檢查干擾源（如水浴等）

5.檢測(cè)器內(nèi)有氣泡：流動(dòng)相脫氣，加柱背壓。

(7)峰拖尾。

1.柱超載：降低樣品量，增加柱直徑，采用高容量固定相。

2.峰值干擾：清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相。

3.硅羥基：

加入三乙胺，用堿性鈍化柱增加緩沖液或鹽濃度，降低流動(dòng)相PH值，鈍化樣品。

4.同前(4)4同前(4)4。

5.同前(4)35.同前(4)3。

6.死體積或柱外體積過大：

盡量減少連接點(diǎn)，適當(dāng)調(diào)整所有連接點(diǎn)，盡量使用細(xì)內(nèi)徑的連接管。

7.柱效下降：

低腐蝕條件，更換柱，使用保護(hù)柱。

(8)峰寬。

1.進(jìn)樣體積過大：同（4）1。

2.在進(jìn)樣閥中引起峰擴(kuò)張L進(jìn)樣前后排出氣泡，以減少擴(kuò)散。

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速度過慢：設(shè)定速率應(yīng)大于每峰10點(diǎn)。

4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大：設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%

5.流動(dòng)相粘度過高：提高柱溫，采用低粘度流動(dòng)相。

6.檢測(cè)池體積過大：用小體積池，卸下熱交換器。

7.保留時(shí)間過長：等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫。

8.柱外體積過大：盡量減小連接管徑和長度。

9.樣品過載：進(jìn)入小濃度小體積樣品。

  寫到最后：

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