一、質(zhì)譜MS

這里提到的質(zhì)譜是指一級(jí)質(zhì)譜，多肽質(zhì)譜鑒定是指使用質(zhì)譜法鑒定多肽。根據(jù)檢測(cè)多肽的氨基酸序列信息來(lái)獲取多肽的序列或翻譯后的修飾信息，主要是對(duì)多肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。串聯(lián)質(zhì)譜常用于多肽鑒定。從代測(cè)樣品中提取出多肽以后，先用色譜法分離，然后離子源將分離后的多肽進(jìn)行離子化，之后一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)完整多肽離子的質(zhì)荷比。

二、高效液相色譜(HPLC)

HPLC可以在短時(shí)間內(nèi)分離蛋白質(zhì)和肽，更重要的是，HPLC可以在制備規(guī)模上生產(chǎn)具有生物活性的肽。反相高效液相色譜(RP-HPLC)最常用于多肽的分離、純化和鑒定，約95%是C18反相硅膠HPLC。其原理是基于多肽的疏水性，使不同的多肽在不同的介質(zhì)條件下分離，具有快速、高效、高回收的特點(diǎn)，在多肽和蛋白質(zhì)的分離和制備方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

HPLC將在整個(gè)過程中進(jìn)行三次確認(rèn)，切割后分析MS和HPLC。制備后，HPLC將再次測(cè)試并交付給QC測(cè)試中心。MS再次確認(rèn)后，將凍干。凍干后，最后一次測(cè)試將在交付前進(jìn)行。

三、液質(zhì)聯(lián)用LC-MS

LC-MS，簡(jiǎn)稱LC-MS，以液相色譜為分離系統(tǒng)，以質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)，樣品在質(zhì)譜部分與流動(dòng)相分離，經(jīng)離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析儀按質(zhì)量數(shù)分離離子片，經(jīng)檢測(cè)儀得到質(zhì)譜圖。液相色譜法（LC）能有效地將試樣中的有機(jī)物中的有機(jī)物成分分離出來(lái)，而質(zhì)譜法（MS）能將分離出來(lái)的有機(jī)物逐一分析分析，從而得到有機(jī)物中的分子量、結(jié)構(gòu)（在某種情況下）和濃度（定量分析）的信息。強(qiáng)大的電噴霧電離技術(shù)，使LC-MS質(zhì)譜非常簡(jiǎn)單，后期數(shù)據(jù)處理簡(jiǎn)單。LC-MS是有機(jī)分析實(shí)驗(yàn)室、藥品、食品檢驗(yàn)室、生產(chǎn)過程控制、質(zhì)量檢驗(yàn)等部門不可缺少的分析工具。

四、核磁C\H譜

肽核磁性1HNMR和13CNMR譜圖是最重要的參數(shù)之一。它能提供包括磁性核電子結(jié)構(gòu)信息和磁性核中成鍵狀態(tài)信息在內(nèi)的磁性核類型信息。根據(jù)化學(xué)位移可以直接判別氫譜中甲基氫、芳?xì)?、烯氫和醛氫等等。有機(jī)化合物的基本骨架和結(jié)構(gòu)可以根據(jù)化學(xué)位移，特別是C化學(xué)位移來(lái)推導(dǎo)。

五、MALDI-TOF

然而，對(duì)于多肽的大分子物質(zhì)，如ESI，在電離過程中會(huì)使大分子離子破碎形成碎片，這是分析的第一步。因此，MALDI-TOF很好地解決了這個(gè)問題。它可以更準(zhǔn)確地測(cè)量多肽大分子物質(zhì)，而不會(huì)產(chǎn)生或減少離子碎片。

其原理：當(dāng)使用一定強(qiáng)度的激光照射樣品和基質(zhì)形成的共結(jié)晶膜時(shí)，基質(zhì)從激光中吸收能量，導(dǎo)致樣品分子電離。它是一種軟電離技術(shù)。

六、肽含量檢測(cè)（元素分析）

通常根據(jù)N元素分析或氨基酸分子來(lái)檢測(cè)肽含量，即目標(biāo)肽在產(chǎn)品中的凈含量。

七、二級(jí)質(zhì)譜測(cè)序LC-MS/MS

蛋白先經(jīng)胰蛋白酶消化成肽段，肽段在質(zhì)譜儀中離子化后，會(huì)攜帶一定量的電荷，根據(jù)檢測(cè)器分析，可得到各肽段的質(zhì)荷比（m/z），即一級(jí)質(zhì)譜圖；為得到肽段更具體的序列信息，部分肽段再次被破碎和分析，產(chǎn)生二級(jí)質(zhì)譜圖。最后，使用質(zhì)譜檢索軟件選擇相應(yīng)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)所有質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并以評(píng)分的形式依次排列所識(shí)別的蛋白質(zhì)。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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