多肽合成的工作原理

Fmoc 和 t Boc是現(xiàn)如今多肽合成的首要辦法，由于 Fmoc 比 tBoc 具有更多的優(yōu)勢，因此讓大家比較認(rèn)可Fmoc 法。多肽合成是一個重復(fù)添加氨基酸的進(jìn)程，合成方向是從 C 端（羧基端）向 N 端（氨基端）進(jìn)行；從前多肽合成大多是在液相中進(jìn)行，而如今大多選用固相合成，這會大大降低每步商品提純的難度；合成柱和添加的氨基酸的側(cè)鏈必須預(yù)先被維護(hù)且羧基端是游離的，制藥在反響之前先用化學(xué)試劑活化它，就可以防止副反響的發(fā)作，

具體合成過程如下：

1、去維護(hù)：Fmoc 維護(hù)的柱子和單體有必要用一種堿性溶劑去除氨基的維護(hù)基團(tuán)。

2、激活和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被一種激活劑所激活溶解，激活的單體與游離的氨基在交聯(lián)劑的作用下交聯(lián)，構(gòu)成肽鍵。

3 、循環(huán)：這兩步反響重復(fù)循環(huán)直到整條肽鏈合成結(jié)束。

4 、洗脫和脫維護(hù)：依據(jù)肽鏈所含的殘基不一樣，用不一樣的脫樹脂溶劑從柱上洗脫下來，其維護(hù)基團(tuán)被一種脫維護(hù)劑洗脫和脫維護(hù)。

多肽是復(fù)雜的大分子，每條序列在物理和化學(xué)特性上都是相同的，有些多肽雖然合成相對簡單，但純化艱難；最常見的疑問是很多肽不溶于水溶液，在純化中，這些疏水肽必須溶于非水溶劑中或特別的緩沖液，但這些溶劑或緩沖液可能不適合應(yīng)用于生物試驗體系，導(dǎo)致研究人員無法運用該多肽達(dá)到自己的意圖，建議可以通過下降肽鏈合成的難度和增強(qiáng)肽鏈的可溶性來改善此現(xiàn)象。

一、下降肽鏈合成的難度

1.削減序列長度

在很多試驗中，下降殘基數(shù)低于20 往往能得到非常好的試驗成果，因為肽的長度添加會致使粗產(chǎn)品純度下降，當(dāng)肽鏈長度添加到20個殘基以上時，就不會簡單得到較高純度的初產(chǎn)品。

2.削減疏水性殘基數(shù)

疏水性殘基占據(jù)優(yōu)勢的肽，在距C端7-12個殘基的區(qū)域會導(dǎo)致合成艱難。一般是因為合成中構(gòu)成b折疊片從而發(fā)生不完全配對。用1個或幾個極性殘基置換 或參加Gly或Pro以翻開肽構(gòu)造會有幫助。

3.削減“艱難”殘基

有多個Cys 、Met 、Arg 、Try 殘基一般難于合成。Ser一般可作為Cys的非氧化更換。

二、增強(qiáng)肽鏈的可溶性

1、改動N端或C端

關(guān)于酸性肽可推薦乙酰化以添加負(fù)電荷，對于堿性肽推薦氨基化以添加正電荷。

2、縮短或加長序列

某些序列富含很多疏水氨基酸，如Trp 、Phe、Val、Ile 、Tyr 和 Ala等 ，當(dāng)它們大于50%一般難于溶解。加長序列或通過削減疏水殘基的辦法下降肽鏈的長度都可以加肽的極性，肽鏈極性越高越溶于水。

3、參加可溶性殘基

關(guān)于某些肽鏈而言，加上一些極性氨基酸能改進(jìn)可溶性。例如給酸性肽的N端或C端加上Glu-Glu；給堿性肽的N端或C端加上Lys-Lys。但是肽鏈兩頭不能改動時，該辦法不可行。

4、通過置換一個或多個殘基改動序列

改動序列內(nèi)某些殘基可以改進(jìn)肽鏈的可溶性。一般單個殘基的更換能夠明顯改進(jìn)其疏水性，而這種改動一般是較為保存的，如用Gly替代Ala 。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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