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蛋白質(zhì)化學(xué)合成研究中,通常使用固相合成方法,因?yàn)樗亲畋憬莸暮铣煞椒?。該辦法在合成長鏈多肽時一樣成效明顯,可是伴隨肽鏈的延長,反應(yīng)會逐漸變得更難進(jìn)行(例如超過150個氨基酸),某些缺殘基的目標(biāo)肽就繼而形成。這種缺殘基的肽鏈也是長肽合成過程中所形成的主要雜質(zhì)。所以,長肽的合成過程中,我們需要戰(zhàn)勝的關(guān)鍵困難是研究更優(yōu)質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法,從而使氨基酸縮合反應(yīng)進(jìn)行的更充分更徹底。并且減少反應(yīng)時間,由于反應(yīng)時間越長,不可控的副反應(yīng)相應(yīng)的就越多,副產(chǎn)物就越繁瑣,這種副產(chǎn)物同樣是整個反應(yīng)所形成雜質(zhì)的重要組成部分。
為了解決長肽合成過程中存在的諸多問題,我們固拓生物采取了一系列效果顯著的措施和方法:
(1)片段合成法:當(dāng)一些多肽用傳統(tǒng)合成方法合成有難度,而且難以純化時,我們也會采取將多肽中某一段的某一些氨基酸縮合過后作為一個整體縮合到肽鏈上去,這樣的方法也可以解決許多合成中存在的問題。
(2)微波合成法:針對合成過程中產(chǎn)生的一部分難以縮合的氨基酸,我們選用微波法來合成,該辦法效果明顯,而且大大縮短了反應(yīng)時間,另外減少了兩種主要副產(chǎn)物的產(chǎn)生。
(3)酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N 末端Cys 多肽和C 末端多肽酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實(shí)現(xiàn)多肽連接的方法。該方法根據(jù)肽鏈中Cys的位置,將整條肽鏈分成多條序列分別合成,最終經(jīng)過液相合縮反應(yīng)得到目標(biāo)肽,該方法不僅大大縮短了長肽合成時間,而且明顯地提高了最終產(chǎn)物純度,因此廣泛適用于含有Cys的長鏈多肽的合成。
固拓生物一直以解決客戶需求為己任,我們發(fā)展的三種長肽合成方法,很好的解決了長肽合成過程中存在的縮合純化困難、雜質(zhì)多、純度低等問題,而且對于含有困難序列,HPLC峰型異常的多肽同樣效果顯著,固拓生物已經(jīng)掌握了成熟的長肽合成技術(shù)。
成功案例:
我們成功合成序列為:His-Val-Glu-Gly-**************Gly********-Thr-**********Leu-Arg-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-*********-NH2(二硫鍵)的包含83個AA的長肽。
HPLC分析:
MS分析:
寫到最后:
杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。
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