1．多肽合成的基本原理

在多肽合成化學(xué)中，多肽固相合成法可以說是一個(gè)很大的突破。它為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基礎(chǔ)，根本原因是它不必純化中間產(chǎn)物就能使合成過程能夠連續(xù)進(jìn)行。現(xiàn)階段全自動(dòng)多肽的合成，基本都是固相合成。主要過程如下：

先在Fmoc化學(xué)合成的前提下將要合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連，多肽合成的起始點(diǎn)就是這一氨基酸的氨基，另外它的氨基酸的羧基（已經(jīng)活化）作用形成肽鍵，持續(xù)循環(huán)這一流程，即可獲得目標(biāo)多肽。

2．Antigen Grade 多肽是否要在多肽的一端增加 Cysteine？

答：不一定，偶連的方式與偶連的活化劑和氨基酸組成有關(guān)。EDC: 通過C端 COOH連接，一般要求序列中無Glu (E), Asp (D),或an amidated C-terminus；Act. EDC Method: 通過 N端的氨基偶連，要求序列中無Lys (K) 或N端沒有被乙?；?/span>MBS:通過Cys的基團(tuán)載體中其他 SH連接形成 S-S. 如果序列中無Cys,就需要添加Cys基團(tuán)，最好增加在N端。

3．有哪些常用的載體用來制備多肽抗體？該如何選擇？

答：需要與載體偶連以提高免疫源性，是因?yàn)?/span>多肽分子量很小，免疫應(yīng)答效果差。載體大多數(shù)為高分量的蛋白質(zhì)，比如KLH (銅藍(lán)蛋白)，BSA, OVA等都是常用的，首選KLH。

4．多長的多肽適合做免疫用？

答：10-15個(gè)氨基酸，雖然長一些免疫效果好一些，但是合成費(fèi)用會(huì)上去。10aa以下的多肽免疫效果比較差。所以推薦10-15個(gè)氨基酸。

5．多肽狀態(tài)如何？如何保存儲(chǔ)存？

答：多肽為粉末狀，一般為灰白色，多肽粉末的顏色差異與它的組成相關(guān)，一般需要避光保存。長期保存應(yīng)保存在-20度，短期可以保存在4度。

6．粗品和脫鹽級別的純度和多肽的長度有關(guān)嗎？

答：有關(guān)

下表列出了每步合成的產(chǎn)率，可以看出粗品和脫鹽級別與多肽長度的相關(guān)性。

7． HPLC純化的多肽有哪些雜質(zhì)？

答：主要有短肽和微量 TFA.

8．多長的多肽為合適？

答：根據(jù)多肽合成需要多肽的長度，電荷，親疏水性等因素。長度越長，合成粗品的純度和產(chǎn)率越低，純化的難度和無法合成的幾率越高。如果多肽太短，合成的多肽在后處理過程中有一定的難度，5肽以下的多肽，如果沒有有疏水的氨基酸，后處理難度會(huì)很大。15個(gè)氨基酸殘基以下的多肽一般都可以得到滿意的產(chǎn)率和得率。

9．為什么含有Cys, Met, 或 Trp的多肽難合成？

答：主要因?yàn)檫@些基團(tuán)不穩(wěn)定，易氧化。這些多肽的使用和儲(chǔ)存都需要特別注意，避免反復(fù)開啟蓋子。

10．為什么有些多肽的合成產(chǎn)率或純度會(huì)比較低？

答：當(dāng)Val, Ile,Tyr, Phe, Trp, Leu, Gln, 和Thr這些氨基酸比鄰或重復(fù)時(shí)，多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解，導(dǎo)致合成效率下降。比如重復(fù) PRO，Ser-Ser, 重復(fù)Asp, 4個(gè)連續(xù) Gly等合成效率和產(chǎn)物都會(huì)導(dǎo)致純度比較低。

11．含 Cys的多肽如何處理？

答：含Cys 的多肽比較容易氧化。多肽純化過程中一般都是在pH2的酸性條件性完成的，這種條件下Cys 的SH,基本保持還原狀態(tài)，不需要特殊的后處理。含 Cys的多肽會(huì)慢慢的氧化，氧化的速度取決于保存條件和序列組成。如果是需要 cys形成S-S，純化一般需要在堿性或中性條件下純化。

寫到最后:

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