凝膠電泳如何對多肽，蛋白質(zhì)進行分離

檢測和定量細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)的科學(xué)稱之為蛋白質(zhì)組學(xué)，目的在于掌握生理學(xué)變化和病癥情況，開發(fā)設(shè)計疾病的生物標(biāo)記和治療藥物的靶點。細(xì)胞體系的一切變動，如衰老、得病或進行藥物醫(yī)治等都會造成一個或幾個蛋白質(zhì)相對豐度或表達(dá)產(chǎn)生變動。蛋白質(zhì)組學(xué)重在檢測細(xì)胞體系內(nèi)的蛋白質(zhì)，并辨識和探測蛋白質(zhì)的變動，比如對蛋白質(zhì)的修飾（翻譯后修飾）或蛋白質(zhì)相對濃度的改變。

翻譯后修飾（PTM）指的是蛋白質(zhì)在翻譯之后的化學(xué)修飾。涉及寡糖鏈的增加、醋酸鹽等含烷基蛋白質(zhì)N-端的修飾、絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸上磷酸基團的參與（磷酸化）等類似活動。磷酸化等PTM活動通常是暫時性的，主要用于細(xì)胞在細(xì)胞中和細(xì)胞間信息內(nèi)容的傳遞。糖基化等PTM過程為結(jié)構(gòu)化轉(zhuǎn)變，往往關(guān)系蛋白質(zhì)折疊、與別的分子的互相作用和與細(xì)胞壁的互相作用。這些代表著活細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)的動態(tài)變化。

蛋白質(zhì)組體現(xiàn)細(xì)胞中或其他分析樣品中所有的蛋白質(zhì)。一個好的細(xì)胞蛋白質(zhì)擁有高達(dá)10~20種不一樣的修飾模式，豐度也會因數(shù)量級的差異而發(fā)生改變。蛋白質(zhì)組學(xué)的目標(biāo)毫無疑問是很大的，對分離和分析技術(shù)要求比較高。

要實現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒別和定量，必須盡量地將每個蛋白質(zhì)與別的蛋白質(zhì)分離。長期以來，凝膠電泳法都是分離完整蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)方法。雙向凝膠電泳通過蛋白質(zhì)的等電點和分子量完成蛋白質(zhì)的分離。

完好細(xì)胞蛋白質(zhì)組的雙向凝膠電泳非常繁雜，并且在分離高達(dá)2000~3000個蛋白質(zhì)的情況下，難以實現(xiàn)蛋白質(zhì)之間的互相分離，或是因為部分蛋白質(zhì)豐度低而無法在凝膠中看到。

凝膠電泳法作為一項進展完善的工藝，具可以實現(xiàn)高分辨率和各種蛋白質(zhì)的定量?，F(xiàn)如今，雙向凝膠電泳的片面性是其不僅費時而且費力，主要是衡量豐度較高的蛋白質(zhì)，不太容易完成膜結(jié)合蛋白等關(guān)鍵蛋白質(zhì)的衡量。

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