1.多肽試樣在上制備柱前為何要做好預(yù)處理？有什么預(yù)處理的辦法？

答：制備用到的色譜柱子因加工的樣品多，比用來(lái)分析色譜柱更加容易受污染，對(duì)于需要過柱樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理能夠很好的延緩制備柱的使用年限。樣品預(yù)處理基本方式有：萃取、過濾、離心、上預(yù)柱。

2.為何流動(dòng)相里需要添加三氟乙酸用作離子對(duì)試劑？還有什么流動(dòng)相體系或離子對(duì)試劑適用于多肽的分離純化？

答：現(xiàn)階段比較常見的流動(dòng)相體系是水配乙腈，以三氟乙酸(TFA)為離子對(duì)試劑。針對(duì)不同的多肽合理選擇梯度洗脫分離多肽。

添加TFA能控制洗脫液的PH，并且作為離子對(duì)試劑與多肽會(huì)協(xié)同作用，可以提高分離效果，大幅提升樣品峰形。也能用作多肽分離純化的流動(dòng)相體系或離子對(duì)試劑有：醋酸體系，磷酸體系，鹽酸體系，七氟丁酸等。根據(jù)調(diào)整PH也能夠取得非常好的分離效果。

3.怎么選擇純化流程所使用的色譜柱填料？

答：不一樣的序列其多肽理化性質(zhì)及疏水性有很大的區(qū)別。大部分情況分子量<4000和親水性多肽用C18柱分離成效zui佳。分子量>5000和疏水性強(qiáng)的多肽以C4柱分離成效zui佳。

C8色譜柱處于C18和C4中間，他的運(yùn)用效果更偏向C18；對(duì)部分特殊選擇性的多肽，也可以考慮苯基柱和聚合物色譜柱。

4.在純化環(huán)節(jié)中挑選聚合物填料的思路是什么？

答：需要使用環(huán)境溫度條件進(jìn)行或超過常規(guī)pH純化時(shí)；可以使用pH規(guī)模更寬的聚合物色譜柱。其優(yōu)勢(shì)是在ji端pH環(huán)境下不能降解，能用強(qiáng)堿與強(qiáng)酸用作流動(dòng)相進(jìn)行分離純化。

寫到最后:

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