化學(xué)法是目前最為成熟和廣泛使用的多肽修飾方法,主要包括液相法和固相法。

1）液相法

液相法是一種經(jīng)典的方法，在純度監(jiān)測和大規(guī)模生產(chǎn)方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。在對(duì)多肽進(jìn)行環(huán)化修飾時(shí)，需要在高度稀釋的溶液(10-3~10-4 mol/L)中進(jìn)行反應(yīng)，以避免分子間反應(yīng)生成線狀或環(huán)狀的二聚體和多聚體。然而，在這種高度稀釋的條件下，往往存在諸如反應(yīng)時(shí)間較長、副作用較多等限制，給后處理增加了不便。針對(duì)這種情況，采用空間位阻較大的樹枝狀硅烷取代碳二亞胺作為縮合劑，取代傳統(tǒng)試劑二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)溶液方式的內(nèi)酰胺環(huán)肽合成，從而獲得純度較高的目標(biāo)化合物。

2）固相法

固相法因其易于分離和純化而被廣泛應(yīng)用于肽的修飾。在固相肽合成中，先將c端氨基酸殘基與載體連接，再組裝剩下的氨基酸，這是合成c端修飾肽的先天障礙。以較為常見的2-氯三苯甲基氯樹脂為載體，固相合成了全保護(hù)肽Pyr-Hi s-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-eu-A rg- pro - net。25 ℃下乙胺化反應(yīng)5 min 后直接切割側(cè)鏈，實(shí)現(xiàn)了肽片段乙胺化和側(cè)鏈切割步驟的連續(xù)耦合進(jìn)行,避免中間產(chǎn)物的分離和純化,并成功地為其他c端多肽的修飾提供參考。

3）酶法

酶在修飾位點(diǎn)的立體選擇性和溫和、快速、高效的合成反應(yīng)條件方面具有很大的優(yōu)勢。在糖肽合成中，糖基化氨基酸通過酶促縮合反應(yīng)與寡肽相接，再通過糖基轉(zhuǎn)移酶完成進(jìn)一步的寡糖修飾。這種酶促反應(yīng)可以在極少的保護(hù)下在水溶液中進(jìn)行。但該酶具有來源單一、不易獲得等局限性。此外,肽鏈中氨基酸的序列的基質(zhì)可能影響其修改效率。以酶法將半乳糖胺連接到肽段上合成糖肽時(shí)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)的收率取決于底物的結(jié)構(gòu)和糖基化，一般較低。隨著DNA技術(shù)和研究的發(fā)展，酶將在多肽修飾中發(fā)揮越來越重要的作用。

4）化學(xué)酶法耦合

將化學(xué)和酶法相結(jié)合對(duì)肽進(jìn)行修飾，可以減少化學(xué)試劑的過度使用造成的污染，并在溫和的條件下保證酶催化的產(chǎn)率。固相合成N端共軛糖基內(nèi)嗎啡肽-1衍生物，在糖基轉(zhuǎn)移酶的催化下，將N-乙?；坊咸腔衔镞B接到化學(xué)法合成的糖肽上，形成目標(biāo)產(chǎn)物N端三糖肽內(nèi)嗎啡肽-1 類似物。這種合成過程只需要極少的保護(hù)。以修飾的硅膠為固相載體，此載體上用化學(xué)法快速合成肽鍵并酶法合成糖苷鍵，成功合成Sialyl lew is x 抗原。

寫到最后:

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