當(dāng)采用固相合成時(shí)，通常只能得到不到50個(gè)氨基酸的多肽修飾，當(dāng)肽鏈上有多個(gè)修飾點(diǎn)時(shí)，往往很難采取以往的策略。針對這一局限性，開發(fā)了一種有效的片段連接方式：天然化學(xué)連接(NCL)。指C端肽硫酯和N端未受保護(hù)的半胱氨酸殘基，形成天然半胱氨酸連接兩個(gè)片段。用鏈烷磺胺作為連接臂獲得C端肽硫酯NCL該策略將兩個(gè)糖肽片段連接成具有82個(gè)殘基結(jié)構(gòu)的抗菌糖蛋白伏蠅素。固相多肽合成法應(yīng)用于環(huán)肽合成Boc/Bzl該策略逐漸從C端延伸到N端，獲得線性肽硫酯肽樹脂。純化線性肽硫酯，在NaHCO3水溶液通過硫內(nèi)酯自發(fā)地通過S原子遷移到N原子的?；纬森h(huán)肽。多肽修飾物種類繁多，主要介紹了幾種主肽修飾物的最新研究進(jìn)展。

1、PEG-肽結(jié)合物

目前在肽化合物中PEG單甲氧基聚乙二醇用于修飾研究(mPEG：CH3O-(CH2-CH2O)n-H)。該修飾先在mPEG 的末端引入羧基、氨基等活性基團(tuán)，或者制備經(jīng)mPEG 修飾的氨基酸衍生物，再利用固相或液相法將其偶聯(lián)到肽序列中去，從而實(shí)現(xiàn)多肽的N端.C端及某些氨基酸側(cè)鏈的聚乙二醇化修飾。研究不同的PEG相對分子質(zhì)量和不同的連接方式對PEG 化的胰島素的生物活性和耐熱穩(wěn)定性的影響，實(shí)驗(yàn)中選取了相對分子質(zhì)量為1100 、2000 、5000 g/mo l 的三種mPEG ，然后分別經(jīng)過琥珀酸酐(SA)、氰尿酰氯(CC)、對甲苯磺酰氯(TC)活化，結(jié)果表明，修飾后的胰島素生物活力降低，但經(jīng)較高相對分子質(zhì)量的mPEG 修飾的胰島素對酶與底物的結(jié)合位點(diǎn)表現(xiàn)出更大的親和力，顯著提高了耐熱性和穩(wěn)定性，且胰島素經(jīng)過氰尿酰氯活化的CC-mPEG(5000 g/mo l)修飾后具。

2、糖肽

多肽糖基化修飾后的產(chǎn)物稱為糖肽，可作為糖蛋白結(jié)構(gòu)和功能的科學(xué)研究的模型工具發(fā)揮重要作用。目前，寡糖多肽鏈之間的連接鍵主要包括C-、N-、O-和S-糖苷鍵，其中N-、O-糖苷鍵是最常用的。糖苷鍵的化學(xué)不穩(wěn)定性大大提高了肽合成的復(fù)雜性。糖苷鍵通常在酸性條件下水解，對于所有的糖基絲氨酸和蘇氨酸衍生物，即使在弱堿性條件下也會(huì)發(fā)生β消除反應(yīng)的可能性。N-連接糖基化可以引入一種糖胺，通過酰胺和羧基的結(jié)合來保護(hù)天冬酰胺。這種方法不需要特殊的保護(hù)糖或肽，可以通過糖胺與多肽鏈中的天冬酰胺殘基的結(jié)合獲得N-連接糖肽。在O-連接糖肽的合成中，絲氨酸和蘇氨酸的羥基作為糖基的受體，需要保護(hù)糖和肽。選擇性去除糖基氨基酸或糖肽的保護(hù)基仍然是一個(gè)長期未解決的問題。

3、磷肽

磷酸化多肽根據(jù)磷酸化氨基酸殘基的不同可分為四類，即N-磷?；嚯?/span>、O-磷?；嚯?/span>、?；姿犭暮?/span>S-磷?；嚯?。O-磷?；嚯氖怯闪u基氨基酸磷酸化形成的，如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸.羥脯氨酸或羥賴氨酸磷酸化；N-磷酰化多肽是通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸磷酸化形成；酰基磷酸肽是通過天冬氨酸或谷氨酸磷酸化形成的；S-磷?；嚯氖峭ㄟ^半胱氨酸磷酸化形成的。磷肽合成的常用方法是將合成好的未被磷酸化的多肽與在磷酸激酶的作用下進(jìn)行酶法磷酸化，但不適用于不能被磷酸激酶磷酸化的多肽。

4、環(huán)肽

較短的線性肽在生物體中容易被各種生物酶迅速降解，形成環(huán)肽可以提高肽的酶和化學(xué)穩(wěn)定性。由于環(huán)肽沒有C端和N端，可以消除或減少氨肽酶和羧肽酶的降解，從而提高肽的抗酶解能力；由于環(huán)結(jié)構(gòu)的形成，增加了對結(jié)構(gòu)的限制，可能增加肽與受體的親和力和選擇性，提高活性，減少副作用，是近年來新藥發(fā)展的新方向。環(huán)肽可分為兩類，一類是均環(huán)肽，氨基酸與酰胺鍵相連；另一種是雜環(huán)肽，除酰胺鍵外還有酯鍵.醚鍵.硫酯鍵和二硫鍵等。

A：均環(huán)肽

均環(huán)肽本質(zhì)上是形成分子內(nèi)肽鍵的過程，其影響成環(huán)的因素是環(huán)的大?。汉衅邆€(gè)氨基酸殘基以上的多肽可以順利成環(huán)，六肽、五肽甚至更小的環(huán)肽很難合成。選擇從云南繁縷中分離的一個(gè)環(huán)五肽(Gly-Ala-Tyr-Leu-A la)為模型肽，由其開發(fā)DEPBT兩種不同的線性肽前體是用液相法和固相法合成的，它們?nèi)匀皇?/span>DEPBT作為縮合試劑，它們完成了環(huán)化反應(yīng)，得到了預(yù)期的環(huán)五肽，但產(chǎn)量只有6%和6.5%，處于很低的水平。根據(jù)分析，環(huán)五肽合成的關(guān)鍵是抑制環(huán)十肽的產(chǎn)生。

B：雜環(huán)肽

雜環(huán)肽的氨基酸殘基之間存在的非酰胺鍵主要是酯鍵和二硫鍵。前者的形成過程與酰胺鍵相似，后者的合成過程與均環(huán)肽不同。本質(zhì)上，兩個(gè)是用氧化劑將兩個(gè)Cys硫基氧化成-S-S-鍵。目前，在多肽二硫鍵的合成過程中，含有硫基的還原多肽從樹脂上裂解，然后在液相中氧化環(huán)合。主要成環(huán)方法DMSO法、鐵氰化鉀法、碘氧化法、空氣氧化法和谷胱甘肽氧化法。在樹脂上直接氧化成二硫鍵的文獻(xiàn)報(bào)道很少，以RinkAmide-MBHA樹脂為載體，采用樹脂Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，利用微波照射促進(jìn)，首先快速高效地合成含有催產(chǎn)素或賴氨加壓素還原多肽的樹脂，然后在微波促進(jìn)和室溫條件下通過碘氧化形成二硫鍵環(huán)肽。該方法具有快速、高效、純化方便的優(yōu)點(diǎn)。整個(gè)環(huán)肽的合成過程只需幾個(gè)小時(shí)，為這種環(huán)肽的大規(guī)模生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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