能否精確標(biāo)記

多肽熒光標(biāo)記基本都在多肽合成環(huán)節(jié)中，就已標(biāo)記上，這時(shí)候幾乎所有活性基團(tuán)完全被保護(hù)起來(lái)，所以肽的熒光標(biāo)記是極其精確的定點(diǎn)標(biāo)記，到最后再經(jīng)過(guò)HPLC純化，提升被標(biāo)記肽的純度至95%之上或98%之上。

比如說(shuō)某段序列采用FAM標(biāo)記

序列為：H2N-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9-COOH

序列里有3個(gè)氨基，都可以各自標(biāo)記上FAM，如

標(biāo)記在N端氨基上：FAM-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9

K6的側(cè)鏈氨基上：D1-A2-G3-L4-E5-K6(FAM)-G7-V8-K9

K9的側(cè)鏈氨基上：D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9(FAM)

而蛋白的熒光標(biāo)記是非定點(diǎn)標(biāo)記的，又被稱為任意標(biāo)記。一般來(lái)說(shuō)一個(gè)蛋白分子中會(huì)有許多個(gè)氨基，巰基，或者是其他基團(tuán)。比如說(shuō)熒光基團(tuán)與蛋白分子的氨基相結(jié)合，這是因?yàn)榘被臄?shù)量不是唯一的，所以蛋白分子和熒光基團(tuán)會(huì)存在很多種結(jié)合，最后結(jié)果一定是分子結(jié)構(gòu)不單一的混合物。只不過(guò)在有些相關(guān)研究中，這個(gè)原因幾乎可以忽略不計(jì)，只需蛋白分子被標(biāo)記上熒光基團(tuán)就可以了，而不在意熒光基團(tuán)標(biāo)記在哪個(gè)位點(diǎn)。

熒光分子的使用量

在多肽熒光標(biāo)記中，一般來(lái)說(shuō)其熒光分子的使用量是蛋白標(biāo)記使用量的幾十倍，乃至數(shù)百倍，比如說(shuō)想取得5mg95%熒光標(biāo)記的多肽，最少也要200mg或300mg熒光分子。

而蛋白熒光標(biāo)記可采用等摩爾量的投料比，熒光分子的使用量也許只有幾毫克。

所以受熒光分子原材料的價(jià)錢限定，多肽熒光標(biāo)記種類非常少，普遍的就FAM、FITC、TAMRA、RhodamineB等。

熒光標(biāo)記過(guò)后的環(huán)境。

多肽熒光標(biāo)記過(guò)后，一般來(lái)說(shuō)可以采用濃度較高的三氟乙酸處理，處于強(qiáng)酸環(huán)境中，再通過(guò)HPLC純化。而蛋白熒光標(biāo)記后的處理就溫和多了，可直接通過(guò)透析或HPLC純化。

寫到最后：

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