1. 親和素(avidin, AV)還是鏈霉親和素(streptavidin, SA)?

雖然親和素(avidin,AV)與鏈霉親和素(streptavidin,SA)對生物素(Biotin)在某些應(yīng)用中，親和素的結(jié)合具有很高的親和力(avidin,AV)主要問題是它的非特異性組合，這是由于親和素造成的(avidin,AV)糖鏈和高等電點(diǎn)的結(jié)構(gòu)(pI)。因此，使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)它可以顯著防止這種非特異性，或者使用相同的生物素來保留它(Biotin)結(jié)合脫糖化親和素的性質(zhì)(avidin,AV)這種非特異性也可以預(yù)防。

2.使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)-生物素(Biotin)作為多功能檢測系統(tǒng).

鏈霉親和素系統(tǒng)生物素(Biotin-Streptavidin-System)在將抗體共軛連接到生物素的幫助下(Biotin)使用親和素(avidin,AV)或鏈霉親和素(streptavidin,SA)其檢測方法幾乎可以應(yīng)用于任何免疫測定。它可以與各種廉價(jià)、高質(zhì)量的商業(yè)熒光染料或酶相連。這使得生物素化抗體具有信號(hào)放大和靈敏度增加的優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)也需要優(yōu)化抗體和共軛連接溶劑。

3.使用生物素化抗體時(shí)，選擇合適的緩沖系統(tǒng).

強(qiáng)烈建議在封閉緩沖液等溶液中避免使用胎牛血清，以防止高背景和低信噪比(fetalbovineserum,FBS)和生物素(Biotin)。一個(gè)好的替代品是0.1%–2.0%牛血清蛋白蛋白(BSAfractionV)。在Westernblot中，脫脂奶粉或酪素(casein)由于殘留的生物素，應(yīng)限制在初始封閉步驟中(Biotin)會(huì)干擾檢測。在這種情況下，抗體溶液應(yīng)與硝酸纖維素膜和PVDF膜兼容，TBS-吐溫(TBS-Tween)中制備。如果這個(gè)時(shí)候高背景還是個(gè)問題，0.2%的高純度–6%酪素(casein)這個(gè)結(jié)果可以改善。

4.減少樣品中殘留生物素的干擾.

有時(shí)使用生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)(Biotin-Streptavidin-System)當(dāng)時(shí)，Westernblot可能會(huì)檢測到非特異性條帶。這對于組織制備和細(xì)胞裂解物來說是一個(gè)特殊的事實(shí)，因?yàn)樗鼈兛赡芎泄矁r(jià)結(jié)合生物作為輔助因素的酶。在這種情況下，增加緩沖溶液的離子強(qiáng)度(~0.5MNaCl)和/或在與一抗共孵化前進(jìn)行生物素(Biotin)封閉是有用的。在這種情況下，使用鏈霉親和素(streptavidin,SA)瓊脂糖微球去除生物素(Biotin)能顯著提高生物素化酶的靈敏度。

5.用于蛋白質(zhì)定量細(xì)胞表面的生物素化.

鏈霉親和素系統(tǒng)生物素(Biotin-Streptavidin-System)在無創(chuàng)技術(shù)中成功地用于化學(xué)標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白，從而表達(dá)細(xì)胞表面和吞咽細(xì)胞的作用(endocytosis)以及一系列細(xì)胞質(zhì)膜受體和抗原的直接和準(zhǔn)確的定量檢測。生物素與特異性受體和抗原相結(jié)合(Biotin)使用ELISA或Westernblot定量檢測數(shù)量。該技術(shù)是一種快速、安全的放射性標(biāo)記技術(shù)替代方法。

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