基因克隆（gene cloning）它是將獲取或生成的目的基因與具有獨(dú)立復(fù)制能力的載體結(jié)合起來(lái)（vector）基因拼湊重組，引入受體細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，然后產(chǎn)生新的基因分子。

自20世紀(jì)70年代第一次DNA分子克隆重組以來(lái)，基因克隆已成為生物學(xué)的關(guān)鍵技術(shù)，促進(jìn)了生物分子學(xué)的進(jìn)步，有效地促進(jìn)了生物醫(yī)學(xué)研究和產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。

目的

基因克隆技術(shù)首先有助于準(zhǔn)確分析目標(biāo)基因的表達(dá)和調(diào)節(jié)，以及蛋白質(zhì)的相互作用，包括調(diào)節(jié)元件、轉(zhuǎn)錄因子研究和非編碼RNA研究；其次，它可以用于大規(guī)模生產(chǎn)難以獲得的天然蛋白質(zhì)；然后，它可以用來(lái)塑造和改造生物基因組結(jié)構(gòu)，使其具有更大的應(yīng)用價(jià)值。此外，近年來(lái)，隨著基因測(cè)序和分析需求的增加以及新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展（NGS）基因克隆技術(shù)在基因克隆技術(shù)的發(fā)展中也發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

歸類(lèi)

根據(jù)基因克隆的類(lèi)型，可分為以下三類(lèi)：

1、經(jīng)典基因克隆需要限制性?xún)?nèi)切酶和連接酶。這也是目前應(yīng)用最廣泛的基因克隆方法，具有操作方便的特點(diǎn)。然而，由于內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)和連接酶效率的限制，它通常適用于小片段基因克隆。

2、需要裝飾酶的基因克隆不需要限制性?xún)?nèi)切酶和連接酶，提高了UDG（尿嘧啶DNA糖基化酶）克隆等基因克隆的靈活性和應(yīng)用空間，具有操作簡(jiǎn)單、克隆效率高的特點(diǎn)。

3、需要重組酶的基因克隆不僅可以實(shí)現(xiàn)高通量克隆，還可以應(yīng)用于原核生物、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等多系統(tǒng)表達(dá)載體，利用重組酶和特定識(shí)別點(diǎn)實(shí)現(xiàn)高效、高效的靶向克隆。目前，基于重組酶的基因克隆技術(shù)，如GateWay技術(shù)和Golden Gate技術(shù)等受到廣泛關(guān)注。

方法

經(jīng)典的基因克隆方法主要包括：目的性基因制備、限制性?xún)?nèi)切酶消化和切割目的性基因和媒介、使用DNA連接酶連接酶切割后的基因和媒介以及制備DNA重組體；將DNA重組體引入宿主細(xì)胞、選擇克隆和識(shí)別以及宿主細(xì)胞中目標(biāo)基因的擴(kuò)展和表達(dá)。

寫(xiě)到最后:

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