合成疏水性肽通常很困難。疏水區(qū)域的鏈間氫鍵導(dǎo)致肽鏈溶劑化不良并減慢反應(yīng)速率。破壞這種氫鍵的措施通?？梢燥@著提高粗肽的純度和產(chǎn)量。

加熱會破壞肽鏈之間的氫鍵，除了通常由于溫度升高而觀察到的速率加速之外，還導(dǎo)致反應(yīng)速率增加。微波加熱直接增加溶液內(nèi)分子的振動，導(dǎo)致溫度快速升高。溫度快速升高可能導(dǎo)致超過所需溫度。微波加熱（圖1A）加速肽合成 并提高粗肽的純度。  快速常規(guī)加熱（圖 1B）雖然在微波加熱一分鐘內(nèi)速度較慢，但在提高粗制“困難”肽的純度和產(chǎn)量方面產(chǎn)生與微波加熱幾乎相同的結(jié)果。6  傳統(tǒng)加熱或微波加熱也會加速容易外消旋的半胱氨酸和組氨酸殘基的外消旋化。

偶聯(lián)反應(yīng)的微波、常規(guī)、梯度和延遲梯度加熱的溫度曲線

圖1A 圖1B 圖1C 圖1D

溫度梯度上較慢的加熱（圖 1C 和 1D）也提高了粗肽的產(chǎn)量和純度，但半胱氨酸的外消旋作用較少。樹脂珠表面的肽鏈暴露于反應(yīng)混合物中，在室溫或溫和加熱下迅速反應(yīng)，而外消旋化緩慢。通常 80-90% 的反應(yīng)位點偶聯(lián)發(fā)生在反應(yīng)時間的前 2 至 4 分鐘內(nèi)。僅需要加熱來加速其余位點的反應(yīng)。如果加熱導(dǎo)致 4% 的外消旋化，那么快速加熱（如使用微波）將導(dǎo)致幾乎所有肽發(fā)生約 4% 的外消旋化。通過梯度加熱，外消旋作用僅影響在較低溫度下尚未反應(yīng)的 10-20% 的肽鏈。這導(dǎo)致非對映異構(gòu)體雜質(zhì)減少 80-90%。

通過微波和常規(guī)加熱，半胱氨酸的加速外消旋化與偶聯(lián)速率競爭，導(dǎo)致非對映異構(gòu)體雜質(zhì)的形成增加。在梯度加熱中，大多數(shù)肽鏈在較低溫度下反應(yīng)，其中外消旋反應(yīng)緩慢并且形成較少的非對映異構(gòu)體雜質(zhì)。在這一發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，我們允許耦合在室溫下進行 2 分鐘，然后開始溫度梯度（圖 1D）。通過這種延遲梯度程序，粗肽的產(chǎn)量和純度最大化，并且半胱氨酸殘基的外消旋化減少。

寫到最后:

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