之前固拓小編發(fā)過一次固拓生物的#多肽切割操作流程，現(xiàn)在又整理了一波小知識(shí)，希望能夠幫助到大家。多肽切割在固相合成中有著很關(guān)鍵的作用，如果切割的干凈，不僅能提高收率也給純化工作帶來便捷。剛剛接觸多肽合成的小伙伴們，通常都會(huì)在切割液的選擇有許多的疑問，那么讓我們聊聊多肽切割的一些小知識(shí)。

切割（Cleavage）屬于肽合成的后處理部分，是指將已合成的肽從載體（樹脂）上切割下來。有人認(rèn)為也包括脫去側(cè)鏈保護(hù)。切割及去保護(hù)是合成中最重要步驟。如果試劑和反應(yīng)條件選擇不當(dāng)，產(chǎn)物會(huì)發(fā)生不可逆的修飾而被破壞，因此在切割時(shí)應(yīng)注意以下幾個(gè)問題：

1、選擇合適的試劑濃度、反應(yīng)時(shí)間、溫度等條件；

2、根據(jù)合成肽氨基酸的不同而選擇合適的切割及脫保護(hù)試劑；

3、氨基酸側(cè)鏈的保護(hù)，在切割時(shí)，切割試劑或切割產(chǎn)物可能對(duì)一些對(duì)其敏感氨基酸側(cè)鏈造成破壞或修飾，因此，反應(yīng)時(shí)要選擇合適試劑和條件，必要時(shí)，對(duì)敏感側(cè)鏈進(jìn)行保護(hù)，使其遭到最小程度的破壞。

一、什么是“切割”？

固相合成結(jié)束后，如果想從樹脂上切下多肽，需要選擇合適的切割試劑，然后用冰乙醚沉淀，離心采集沉淀物，通過HPLC分離純化，冷凍干燥獲得產(chǎn)品。(下列切割均針對(duì)樹脂進(jìn)行處理)

二、是前后切割過程

三、切割流程

準(zhǔn)備要切割的樹脂

這里只需要樹脂里面的溶劑成分被洗滌掉并充分干燥樹脂，理想狀態(tài)是：像干燥的沙子一樣，不容易占到其它物體的表面，例如瓶子或者紙。

四、切割液的選擇與配置

這方面資料在網(wǎng)上也有很多，針對(duì)不同的多肽序列，選擇不同的切割液種類。

這里主要列幾種常見的切割液比例。

1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5：5：2.5：2.5：2.5

前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種都可以使用。（每1g樹脂加8ml左右的切割液）

當(dāng)然還有很多特殊的切割方法，會(huì)大大提高產(chǎn)物收率，具體的問題，可以聯(lián)系小編13355716090（微信手機(jī)同號(hào)）

五、切割過程

一般時(shí)間在2.5小時(shí)左右，要不斷地震動(dòng)，溫度為室溫。

有些多肽很容易氧化或變質(zhì)，還需要排除容器內(nèi)的空氣(用氮?dú)獯?，有時(shí)還需要適當(dāng)降低環(huán)境溫度，比如0-10℃。

六、抽濾器收集濾液

抽濾的方法很多，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有自己的方法，小編主要說下，這是的濾液里面含有被切割下來的多肽和一部分側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)。一些不溶于TFA的保護(hù)基團(tuán)，例如Pbf，是一種白色漂浮物，同樹脂一起被過濾掉了。

七、沉淀，離心，洗滌

小編認(rèn)為 這個(gè)步驟是最影響收率的一步，處理不好的話，就會(huì)損失很多 多肽。

1）溶劑：沉淀用的是冰乙醚，這里的冰字是要求 乙醚的溫度要很低，例如放置在-20攝氏度的冰箱里面。當(dāng)然使用常溫的乙醚，也是可以的。乙醚和濾液的體積比為6：1比較合適。

2）儀器：能達(dá)到3000轉(zhuǎn)每分鐘的離心機(jī)

3）方法：在時(shí)間允許的情況下，小編建議 把濾液往6倍體積的冰乙醚慢慢地滴加，可以用磁力攪拌器攪拌冰乙醚。目標(biāo)是讓剛加進(jìn)去的濾液立刻析出多肽。

4）離心：把已經(jīng)析出，變白的溶液離心即可。

5）洗滌：一般建議洗滌3次，每一次都要把溶液攪拌均勻。

八、抽干，得到粗品肽

離心3次之后的肽，各種側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)基本被乙醚洗滌了，這時(shí)只要將濕的多肽放到 真空釜 抽干即可。（別放恒溫箱里面）

我相信如果你按照上面的步驟一步一步來，你一定會(huì)得到理想的回報(bào)。因?yàn)楹芏喽嚯亩加凶约旱奶厥庑?，如果遇到一些特殊情況，可以隨時(shí)聯(lián)系小編。